我波利諾娃(D.R.) Zagirova,L.Y. 科卡耶娃布斯科(I.V.) Levantsevich,S.N. 伊蘭斯基
近年來,白俄羅斯的馬鈴薯和種子種群的植物檢疫狀況明顯惡化。 某些類型的有害生物的作用及其在農桿菌素中的比例已經改變。 許多疾病不僅增加了疾病的危害(晚疫病,交鏈孢菌,各種sc瘡,細菌病,枯萎鐮刀菌腐爛),而且還研究了新的,未經充分研究的疾病,例如傷口水腐爛(圖1)。 這種疾病發生在印度,中亞和其他南部國家,在白俄羅斯的戈梅利,布列斯特,格羅德諾和明斯克地區也有發現。 像其他居住在土壤中的卵菌一樣,在長時間的降雨過程中,在水分過多的情況下,終極腐植酸也會造成嚴重破壞(在排水不佳的地區)(Taylor等,2008)。
在白俄羅斯,隨著生長季節溫度的升高,這種疾病的蔓延在數年之內得以觀察:在某些批次的馬鈴薯中,有8-10%的塊莖受到了影響。 塊莖的傷口含水腐爛會造成重大破壞,這是由於缺乏抗性品種,發達的保護措施以及在塊莖受到破壞的情況下疾病的快速發展造成的(Zhuromskaya,2003; Ivanyuk等,2005)。 該病僅影響塊莖。 在俄羅斯,傷口的腐爛還不明顯。
在這項工作中,我們調查了白俄羅斯國家馬鈴薯和園藝科學院科學與實踐中心(明斯克州)從受害的馬鈴薯品種Vektar Belorussian,Skarb和育種雜種中分離得到的4種導致傷口腐爛的病原菌。 該研究的目的是確定分離菌株的種類,與馬鈴薯塊莖有關的毒力,評估在不同環境溫度下的生長以及對甲霜靈的抗性。
將分離物的菌絲體在液態豌豆培養基上生長(將180 g冷凍的豌豆在10升蒸餾水中煮沸1分鐘,然後在30個大氣壓下高壓滅菌1分鐘); 從每個菌株中分離DNA。 為了分離DNA,將冷凍的菌絲體在液氮中研磨,在CTAB緩衝液中裂解,然後用氯仿脫蛋白。 DNA儲存在–20°C的去離子水中。 對使用引物ITS18和ITS5,8擴增的物種特異性基因組區域(核醣體基因1S和1S區域以及內部轉錄的基因間隔子ITS2的區域)的核苷酸序列進行分析(White,1990),表明所研究的菌株屬於終極腐霉屬(Pythium Ultum Trow)物種。 (同義詞Globisporangium ultimum(Trow)Uzuhashi,Tojo和Kakish)。
所有研究的菌株均影響置於潮濕室內的Gala馬鈴薯塊莖的切片。 在它們上形成黑點,隨後變成潮濕的深層潰瘍(圖2)。 通過將終極體育菌絲體置於塊莖切片的中心進行感染。
接種的塊莖圓盤在+ 22°C下孵育。 在最初的2天中註意到受影響區域的最大生長速率,然後潰瘍區域實際上沒有變化。
該模式對所有研究菌株均有效。
在5、15、24和34°C的溫度下,在燕麥瓊脂培養基上估計菌株的生長速率(圖3)。 在所有溫度下均觀察到生長。 在24°C下觀察到最大生長速率(86毫米杯在2天內完全長滿了)。 在15和34°C時,生長速度明顯降低(杯子分別在4和3天內長滿)。
在15、24和34°C的溫度下,所有研究菌株的生長速率沒有差異。 在5°C的溫度下,菌株P1的生長速度快於其他菌株(第20天為4毫米),P4的生長速度稍慢(第10天為4毫米),P2和P3實際上沒有生長。
還應注意的是,在菜盤上種植後,在24°C的溫度下立即開始生長,在15和34°C的溫度下,開始活躍生長的時間延遲了1天,在5°C的情況下延遲了2天。
甲霜靈(及其異構體甲霜靈)被認為是控制土壤卵菌的最有效藥物。 甲霜靈能夠穿透塊莖並提供(即使濃度很低)其長期保護作用(Taylor等,2008; Bruin等,1982)。 但是,在人群中出現耐藥菌株後,甲霜靈的有效性急劇下降。 在美國的幾個地區發現了高抗性菌株(Taylor等,2002)。 由於沒有關於白俄羅斯P.ultimum菌株對甲霜靈的抗藥性的數據,因此決定在這項工作中測試其對藥物的抗藥性。
在燕麥瓊脂培養基上加入不同濃度的殺菌劑後,對殺菌劑甲霜靈的敏感性進行了研究(Pobedinskaya,Elansky,2014)。
所研究的菌株對甲霜靈的抗性有所不同(表1)。 因此,在殺真菌劑濃度為1 mg / l時,P4菌株的生長完全停止,其餘菌株大大減慢了速度。 菌株P1和P2在甲霜靈濃度為10 mg / L的培養基上生長非常緩慢。 所有菌株的計算出的有效濃度EC50(相對於對照而言,使菌株的生長速度減慢2倍的殺菌劑濃度)小於1 mg / L。 因此,所有研究的菌株對甲霜靈均敏感。 已經顯示出它在抑制終極瘧原蟲的生長方面非常有效。
據布魯因等。 (1982)在植株生長期間用甲霜靈以0,5 kg / ha的劑量處理後,塊莖中殺菌劑的積累為0,055μg/ g,皮層中為0,022μg/ g,塊莖中部為0,034μg/ g。 根據我們的數據,甲霜靈的濃度不足以抵消這種疾病,但會減慢其發展速度。
當在燕麥培養基上生長時,所有菌株均在單培養中形成卵形孢子(圖4),這是終極瘧原蟲的典型特徵。 菌株的成對剪接沒有顯示出營養不相容的明顯症狀-杯子均勻地覆蓋有菌絲體。
獲得的數據表明,P。ultimum是一種植物病原體,能夠在較寬的溫度範圍內快速生長,包括在5°C的儲存溫度下。 它對馬鈴薯塊莖的組織有毒,並形成能長期存活的卵孢子。 因此,該物種是一種危險的植物病原體,可能對農業構成威脅,需要進一步研究。
該研究是在俄羅斯科學基金會(項目N 14-50-00029)的支持下進行的。
表1.終極體育菌株對甲霜靈的敏感性
應變 | 甲霜靈濃度,mg / l | ||
0(控制) | 1 | 10 | |
P1 | 63 | 6 | 0 |
P2 | 65 | 5 | 0 |
P3 | 59 | 0 | 0 |
P4 | 61 | 0 | 0 |
P1 | 105 | 10 | 3 |
P2 | 110 | 10 | 3 |
P3 | 95 | 0 | 0 |
P4 | 98 | 0 | 0 |
大約給出了3次測量的平均數據。
該文章發表在《馬鈴薯保護》雜誌上(1年第2017期)